校準曲線標準方法規定的步驟

儀器校準校準曲線也確定了方法的測定范圍。校準曲線的繪制 用一系列被測物標準溶液，按照標準方法規定的步驟，將被測物轉變為有色溶液。制備好的標準系列和空白，方法選定的波長下，測定吸光度。已被測物濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制校準曲線。對標準系列，溶液以純溶劑為參比進行測量后，應先作空白校正，然后繪制標準曲線；標準溶液一般可直接測定，但如試樣的預處理較復雜致使污染或損失不可忽略時，應和試樣同樣處理后再測定。校準曲線的斜率常隨環境溫度、試劑批號和貯存時間等實驗條件的改變而變動。因此，測定試樣的同時，繪制校準曲線為理想，否則應在測定試樣的同時，平行測定零濃度和中等濃度標準溶液各兩份，取均值相減后與原校準曲線上的相應點核對，其相對差值根據方法精密度不得大于否則應重新繪制校準曲線。

校準曲線的檢驗 

線性檢驗：即檢驗校準曲線的精密度。

對于以個濃度單位所獲得的測量信號值繪制的校準曲線，分光光度法一般要求其相關系數 否則應找出原因并加以糾正，重新繪制合格的校準曲線。

截距檢驗：即檢驗校準曲線的準確度，線性檢驗合格的基礎上，對其進行線性回歸，得出回歸方程=+然后將所得截距與作檢驗，當取置信水平，經檢驗無顯著性差異時，可做處理，方程簡化為=移項得=線性范圍內，可代替查閱校準曲線，直接將樣品測量信號值經空白校正后，計算出試樣濃度。當與有顯著性差異時，表示校準曲線的回歸方程計算結果準確度不高，應找出原因予以校正后，重新繪制校準曲線并經線性檢驗合格。計算回歸方程，經截距檢驗合格后投入使用。

回歸方程如不經上述檢驗和處理，就直接投入使用，必將給測定結果引入差值相當于解決的系統誤差。

斜率檢驗：即檢驗分析方法的靈敏度，方法靈敏度是隨實驗條件的變化而改變的完全相同的分析條件下，僅由于操作中的隨機誤差導致的斜率變化不應超出一定的允許范圍，此范圍因分析方法的精度不同而異。儀器校準例如，一般而言，分子吸收分光光度法要求其相對差值小于而原子吸收分光光度法則要求其相對差值小于等等。校準曲線的控制方法 被測物轉變為有色溶液的反應稱為顯色反應或發色反應。顯色反應的介質條件、顯色劑用量、顯色反應的時間和溫度、為消除共存物干擾而加入的掩蔽劑、甚至加試劑的順序，都要按照方法步驟的要求執行。有時，標準系列雖然不像實際試樣那樣組成復雜，但仍要求與試樣進行同樣的處理步驟，以便控制校準曲線上的數據點的空白、回收率等因素。

建立校準曲線時，測量吸光度的參比有兩種選擇。種方法用純溶劑作參比，兩個比色皿都放溶劑時，樣品比色皿"吸光度測定值為比色皿成對性校正值，此后所有樣品吸光度測定值都須扣除此值，進行校正。然后，以純溶劑為參比，測定空白及標準系列的吸光度，繪制校準曲線。第二種方法直接用空白為參比。當兩個比色皿都放空白時，測定比色皿成對性校正值，然后測定標準系列的吸光度，繪制校準曲線。兩種方法得到兩條校準曲線互相平行，但種方法可測定空白的水平，后一種方法不能測定空白，理論上校準曲線通過原點。若空白為零，兩條校準曲線重合。無論用什么作參比，實樣測定時應該使用與建立校準曲線相同的比色皿和同樣的參比。